Implicancia de la inmunidad innata del epitelio bronquiolar en la modulación y prevención del asma / Implication of innate immunity in modulating bronchial epithelium and prevention of asthma

El asma alérgica ha incrementado su prevalencia, constituyéndose como un problema mundial de salud. Factores ambientales derivados de la vida moderna han sido vinculados a este fenómeno a través de la hipótesis de la higiene; la cual postula que la vida urbana disminuye la potenciación de la inmunidad innata, lograda a través del reconocimiento de estímulos microbianos por los receptores Toll-like (TLRs), conduciendo a la mayor prevalencia de respuestas alérgicas. Las investigaciones en asma en el último siglo han tenido como objetivo la disminución de la respuesta inmune adaptativa Th2 asociada a las alergias; sin embargo han conseguido escasos avances terapéuticos. Actualmente, es creciente el número de evidencias que implican a los componentes estructurales de la vía aérea en el inicio y progresión del asma; no obstante su rol en la prevención de la inflamación alérgica no ha sido suficientemente evaluado. Por lo tanto, el presente trabajo de Tesis Doctoral tuvo como objetivo general el estudio de la interacción de la inmunidad innata del epitelio bronquiolar y la inflamación alérgica del asma.

ABSTRACT: Recently, asthma rates have increased becoming a global health problem. The role of environmental factors in this increase, due to modern lifestyles, has been suggested by the hygiene hypothesis, which postulated that the urban hygienic conditions skip the early exposure to microbes hence that are clue to promote innate immune activation by signalling through the Toll-like receptors (TLRs) and thus preventing the allergic responses. Even though many investigations on asthma have been focused on the reduction of the allergic Th2-nflammatory response in the last century, the therapeutic advances have been scarce. Nowadays, there is increasing evidence of the involvement of the airway epithelial cells on the origin and progression of asthma. However, the role of these cells in preventing the triggering of allergic inflammation has not been evaluated. Therefore, the main objective of this thesis was to study the interaction of innate immunity of bronchiolar epithelium and allergic inflammation in asthma.

Modulation of thyroid hormone receptors, TRα and TRβ, by using different doses of triiodothyronine (T3) at different times / Modulação dos receptores de hormônio tireoidiano, TRα e TRβ, utilizando diferentes doses de triiodotironina (T3) em diferentes tempos

OBJECTIVE: To examine the effect of different doses of triiodothyronine (T3) on mRNA levels of thyroid hormone receptors, TRα and TRβ, at different times. MATERIALS AND METHODS: 3T3-L1 adipocytes were incubated with T3 (physiological dose: F; supraphysiological doses: SI or SII), or without T3 (control, C) for 0.5, 1, 6, or 24h. TRα and TRβ mRNA was detected using real-time polymerase chain reaction. RESULTS: F increased TRβ mRNA levels at 0.5h. After 1h, TRα levels increased with F and SI and TRβ levels decreased with SII compared with C, F, and SI. After 6h, both genes were suppressed at all concentrations. In 24h, TRα and TRβ levels were similar to those of C group. CONCLUSIONS: T3 action with F began at 1h for TRα and at 0.5h for TRβ. These results suggest the importance of knowing the times and doses that activate T3 receptors in adipocytes.

OBJETIVO: Examinar o efeito de diferentes doses de triiodotironina (T3) sobre a expressão gênica dos receptores TRα e TRβ em diferentes tempos. MATERIAIS E MÉTODOS: Adipócitos, 3T3-L1, foram incubados com T3 nas doses fisiológica (F, 10nM) e suprafisiológicas (SI, 100nM ou SII, 1000nM) ou veículo (controle, C) durante 0,5, 1, 6 ou 24h. mRNA dos TRs foram detectados utilizando PCR em tempo real. RESULTADOS: Níveis de TRβ aumentaram em F em 0,5h. Após 1h, níveis de TRα aumentaram em F e SI comparado ao C, enquanto TRβ diminuiu no SII comparado com C, F, e SI. Após 6h, ambos os genes foram suprimidos em todas concentrações. Em 24h, níveis de TRα e TRβ retornaram aos do C. CONCLUSÕES: Ação do T3 em F iniciou-se em 1h para TRα e 0,5h para TRβ. Esses resultados são importantes para determinar tempo inicial e dose de T3 em que os receptores de HT são ativados em adipócitos.

Modulação do granuloma periovular esquistossomótico: morfometria e comportamento da matriz extracelular / Periovular schistosomal granuloma modulation: morphology and behavior of the extracellular matrix

O granuloma formado em torno de ovo maduro do Schistosoma mansoni no fígado se modifica no seu tamanho, forma e composição com o passar do tempo. Este fenômeno,denominado "modulação imunológica", tem sido atribuído fundamentalmente a fatores imunes. Como a "modulação" ocorre apenas no fígado, e não em outros órgãos, a participação de fatores locais parece ser decisiva para que o fenômeno ocorra. Estes últimos têm sido pouco estudados e agora, numa tentativa de contribuir para o seu entendimento, foram particularmente considerados. A presente investigação foi feita em camundongos infectados com 50 e 100 cercárias do S. mansoni. Os granulomas formados em torno de ovos madurosforam estudados e comparados em três órgãos (pulmão, fígado e intestino) e em três fases distintas da infecção: aguda (8 semanas), intermediária (16 semanas) e crônica (22 semanas), com técnicas histológicas, morfométricas, bioquímicas e de imuno-fluorescência. Os resultados confirmaram que o fenômeno da modulação é exclusivamente hepático, não sendo observadas modificações semelhantes no pulmão e intestino. Os elementos da matriz extracelular pesquisados (colágenos de tipo I, lU e IV, fibronectina, laminina, proteoglicanos e elastina) estiveram presentes em todos os locais, mas eram muito mais proeminentes no fígado. Exceto a elas tina, que apareceu apenas no fígado, exclusivamente em casos crônicos. A avaliação morfométrica indicou redução no volume, área e densidade de volume apenas nos granulomas hepáticos ao longo das três fases estudadas. A abundância de elementos da matriz extracelular presente nos granulomas hepáticos foi a principal alteração responsável pelos aspectos morfológicos da modulação. Esse aspecto foi correlacionado com particularidades da estrutura celular não parenquimatosa do fígado, onde as células perinusoidais e as células de Kupffer participam de um eixo "sui generis" relacionado com a formação e degradação da matriz. No estudo do fenômeno da "modulação" do granuloma esquistossomótico fica evidente que é o comportamento destes elementos celulares que determina as modificações da matriz extra-celular em torno dos granulomas hepáticos, representando, na sua essência, o fenômeno da "modulação".

Evidentiation of paramyosin (Sm-97) as a modulating antigen on granulomatous hypersensitivity to Schistosoma mansoni eggs

A Schistosoma mansoni adult worm anionic fraction (PIII) has previously been shown to protect mice against challenge infection and to reduce pulmonary and hepatic granulomatous hypersensitivity. Serum from PIII-immunized rabbit was used to screen a gt11 cDNA library from S. mansoni adult worm in order to identify antigens capable of modulating granulomatous hypersensitivity. We obtained four clones with 400 (Sm-III.11), 900 (Sm-III.16), 1100 (Sm-III.10) and 1300 (Sm-III.12) bp of length. All clone-specific antibodies were able to recognize most of the PIII components. The sequence analysis showed that these clones presented high homology with S. mansoni paramyosin (Sm-97). These findings describe a new function to this antigen with an important role in modulation of granulomatous hypersensitivity to S. mansoni eggs.

Múltiples estrategias de evasión de la respuesta inmune por citomegalovirus humano: Mecanismos moleculares / Multiple estrategies of the immune response by human cytomegalovirus. MHC down-regulation

El citomegalovirus humano (HCMV), miembro de la familia de los herpevirus, es un patógeno ubicuo importante en individuos inmunosuprimidos y/o inmunológicamente inmaduros. El balance global en la relación huéspedd-virus depende del estado del sistema inmune, el cual contribuye a través de varios mecanismos efectores al control viral. Después de la primoinfección, aún los individuos inmunocompetentes son incapaces de erradicar al virus debido al establecimiento de un estado de persistencia viral que es resultado del desarrollo de múltiples estrategias de evación al sistema inmune, entre las que se incluyen el ocultamiento viral, el efecto de suspresión inmune y la interferencia a los proceso naturales de presentación de antígeno. Probablemente el mecanismo más relevante para el éxito de la infección viral sea la evasión de la respuesta inmune mediada por células, a través de la disminución de la expresión de moléculas de histocompatibilidad en las células infectadas